液相色谱仪维护与保养

2021-04-23

关于液相色谱仪维护与保养、修理这些都是令人头疼的事情，总不能遇到点小问题就找人处理吧?那仪器保养维护这块呢?所以，自己会不就省事多了，下面骏辉腾告诉你怎么做。

液相色谱仪是归于易学难用的仪器，特别讲究“正确运用”和运用经历。

液相作业人员接触最多的应该是活动相，活动相是构成液相色谱各种问题的首要源头。

液相色谱仪常见的缺点：一是堵，二是漏。下面这两点分别展开谈论。(注：活动相以甲醇为例，色谱柱以C18为例)

赛默飞液相色谱仪

一、先谈论“堵”的情况。

“堵”的表现现象是柱压反常升高，直接原因是流路不畅。堵塞的首要方位是在色谱柱的前端，首要原因是活动相里有杂质，杂质的首要来历是细菌。

1、“堵”的原因：制作活动相时细菌污染。

首要，我们要知道到，一般的国产甲醇其实不需求额定过滤处理，直接运用没有问题。即使是有些固态微粒杂质，也能在液相流路体系前端的过滤头上打扫，实在简略引起问题的，是水中的细菌。

新制备的纯水在室内放置几天会长菌，而这些细菌虽然肉眼不可见，却足以堵塞柱填料颗粒的空隙，构成柱子很快作废。这是在制作活动相时构成的细菌污染的原因，处理它的方法很简略，保证水的牢靠性。这儿有两种方法引荐：

(1)志向的方法当然是购买实验室专用纯水机，既便当又牢靠，质量也定心。缺陷是价格不菲。

(2)成箱购买市售品牌纯净水，如，500mL一支的怡宝或娃哈哈，这些水的质量足以唐塞液相色谱的要求。先随机抽取一支做一下细菌平板实验，待菌落数合格方可运用。这样每次只需单独开一支即可，也很便当。每次本钱2元左右。

※这儿特别指出一个细节：在绝大多数书本上，凡谈到制作活动相都会谈到后面有一个过滤的步骤。但是从我们长期运用的实践效果来说，只需能保证水的质量，这一步完全可以也应当去除。

原因有以下三点：

(1)活动相过滤有理论上有长处，但是，实践操作时因为不可能做到专瓶专用，反而简略构成的穿插污染，关于配比复杂的活动相影响更大。

(2)活动相过滤在经济本钱上不划算。买一套过滤设备要6000多元，且过滤器公认是比较简略损坏的设备。首要是过滤片的本钱太高，一片要几十元。按一般液相柱的正常运用寿数核算，过滤片的本钱会远远高于色谱柱的本钱。

(3)活动相过滤关于作业功率本钱不划算。运用溶剂过滤器有一个预清洗、装备、运用、用后清洗，晒干的进程，至少也有一个小时的时间。这个本钱也不能忽视。

(4)在实践作业未发现活动相不过滤会对柱寿数有任何影响。我们最少有6年时间没有做过活动相过滤的作业，但是和国内同行相比较，在同等运用强度下我们的柱寿数是比较长的。

2、“堵”的原因：运用活动相时的细菌污染。

指的是：

活动相刚开始没有长菌，在运用时却产生了细菌污染。这首要是在运用多元液相色谱仪时的一种不良运用习气构成的。

举简略的比方：

50%的甲醇水活动相，有两种运用方法。一种方法是在上机前配好混合在一起，另一种方法是在流路A放纯甲醇，流路B放纯水。

从单纯实验效果来说，后一种有明显的长处：首要是简略，不需求实验者另个核算配比混合，其次是比例精确，能得到保存时间重复性极好的实验效果。

但是，它有一个丧身的缺陷，纯水在活动相瓶中几天时间会长细菌(许多情况下不只仅用纯水作活动相，而是用缓冲盐溶液，自身是优质肥料，细菌长得更灵敏)，一旦有细菌柱子坏得很快。所以这种方法要求操作人员每次实验都要用新制备的纯水，更要求在每次实验后把水相换掉，换成甲醇冲刷洁净，这一点在实践作业中许多人知道不强，知道到了但屡次运用中总有一两次会遗漏，但是往往这一两次足以产生丧身的影响。因为液相色谱柱的堵塞是不可逆的。

所以，宁可牺牲小小的保存时间的重复性，也不要用纯水溶液作为活动相的一组。从实践实验效果来说，我建议用10%的甲醇水代替纯水溶液(以前我做过不同比例甲醇水的细菌总数实验，在5%底子可以抑菌，在10%及以上可以完全去菌了)，这样可以有效打扫长菌的危险，既可作活动相，也可冲柱。在制作活动相时会核算得费事一些，但是一次费事，终身获益。

3、“堵”的原因：不适当操作。

常见问题的有以下几种：

(1)在替换零件时挑选的类型有误，接口不是很匹配，在拧紧的时候产生变形而使得管路堵塞。

(2)样品处理液净化得不洁净，长期会在六通阀和柱之间构成堵塞不畅。

(3)在运用手动六通阀时，有些人或许因为手劲小的原因，翻滚的不到位，所以构成流路构成了死堵，压力快速升高超过警戒值。

(4)在运用金属管路作出废液管时，应当留意先在废液瓶中放一些水，并把废液管的出口端放在液面下。假设位于在液相上且实验运用较高浓度的缓冲盐溶液，在停机时或许在出口端结晶成块并构成堵塞。这种情况不常见，但却的确产生过。

二、讲讲查“堵”的方法。

在产生“堵”的现象后，需求找出原因，首要是什么方位产生了“堵”。留意，绝大多数情况下，整个体系只会有一个当地产生堵塞。

查堵的方法是从尾向前逆向分段拆开，仔细观察压力数值，假设某一个部件(柱子在外)装上和拆下时的压力不同很大，可发展变化判别。至于柱的堵塞，可以通过换相同标准的柱的压力是否共同来判别。

三、下面再谈一下“漏”的问题。

“漏”分两种：漏液和漏气。

1、漏液

液相色谱仪从活动相瓶到废液瓶之间的流路是一个全封闭体系，内部压力很高，但外部却能保证一滴不漏。假设某个部件产生了漏液，那是缺点地点。

漏液的原因分两种：

(1)接触硬件不当

在替换零件如流路管或换柱时，换的接头接口不匹配，构成漏液。要留意不同公司的柱子接头许多是不同的，乃至同一家公司在不同时期出产的液相柱接头也有很大差异。当然选用PEEK接头是一个较好的处理方法，不只通用性好，而且靠手拧能保证不漏液。

即使是接口自身是匹配的，但是假设操作不当也会漏液，一种不当是力度掌握不好，拧得太紧或太松;另一种不当是丧身的差错：滑丝，这是往往是着手才能不太强，螺丝钉很少拧的作业者犯的差错，滑丝的结果不只是漏液那么简略，常构成重要部件的作废。处理这个问题只能靠恶补底子功来实验，那是拧螺丝。

(2)运用仪器不当

假设是运送泵漏液，常见的原因是在活塞方位缓冲盐分出构成。

分出的原因有两个，一是运用缓冲盐溶液时忽然加入了纯甲醇而分出，这种差错很简略防止，这是尽量不要用纯的甲醇和纯水。只需互相有10%的比例是不会出现这个问题。另一原因是在用缓冲盐溶液(不论甲醇含量有多少)作活动相时，实验完毕后没有换甲醇水冲刷，使得微渗的活动相干燥构成晶体构成。

不过，运送泵漏液并不是非得立刻修不可，冲刷洁净并在往后的运用中多加留神一般都可以正常运用。

检测器漏液是个很费事的事，一般都是吸收池的问题，替换的费用相当高。但是并不是说必定要立刻替换，还可以从实践实验效果看能否迁就运用。

2、漏气

漏液是从内部向外漏，而漏气则是外部的气体进入液相色谱仪的流路内部构成了气泡。下面按流路的方向逐一部件剖析产生气泡的原因和相应处理方法。

(1)过滤头

抽液时，在流路管中有不规则但继续的小气泡产生，这时考虑的是活动相有没有脱气(需求特别提醒即使是有了真空脱气机也是要先超声脱气的，最少可以削减脱气机的作业压力并进步作业功率)，假设现已脱了气，则要留意过滤头的污染也会构成这种现象。处理方法比较简略，拧下过滤头在稀硝酸中浸泡，超声半小时，洗净后装回去即可。

(2)通明流路管

指的是在过滤头和运送泵之间的那一段管路。这一个部分往往不是有点气泡，而经常是整个管中满是空气而操作人员却浑然不知，致使运送泵作业了半天才发现活动相瓶里的液体一点也没少。这也是我们常说的液相色谱仪至少一周要开机一次的原因(我们做液相必定要有“微渗”的概念)。假设长期不用，这一段管路的液体会彻底干掉，而布满空气的管路和布满液体的管路不仔细看是分辩不出的。

这种情况关于运送泵很危险，因为，泵从规划来说是运送液体而不是气体，内部的液体关于活塞来说起到了机油的效果，假设活塞杆上还残存了一些缓冲盐，则极易拉伤，构成不可逆转的影响。

关于这种情况，要杰出“预防为主”，如，液相色谱运用人员要相对固定和稳定，作业中合理调配资源，每台机一周击至少作一次实验，如长期不用最少每周要冲活动相2 小时。养成杰出的作业习气很重要。

假设不慎出现了这种问题怎么办?我的建议是用外力使管路中布满液体。详细如下：

①找到流路管进入运送泵的接头。

②拧下来。

③用一洁净的洗耳球的尖部对准管路的平坦堵截。

④吸液体，看液面从活动相瓶里上升，至离洗耳球5 厘米左右时中止该动作。

⑤快速把接头拧回运送泵上(这个进程或许会有少数活动相外泄，这是正常现象)。

⑥开机，翻开排液阀门，启动运送泵。

⑦等排液管中流出的溶液没有气泡时，再关闭排液阀，仪器正常作业。

(3)运送泵和柱子

这些部分进了气泡一般不怕，冲掉即可。

(4)检测器

应该说，整个流路中只需有一个气泡都会在检测器上得到剧烈的信号反映，检测器内部的气泡一般都能被冲走，但也有很难冲掉的残留气泡的情况。

假设检测器里有残留气泡，会有特征明显的表现形式，是在走基线时会时不时间隔出现直上直下信号很大的信号峰。这时先看一般流量能否冲走，假设冲不走，那只能拆柱，把检测器直接连到运送泵的出口，加大几倍流量冲刷，则肯定能冲走气泡。

以上，首要讲的是液相色谱仪维护与保养的方法方法，怎么查看缺点和用什么方法维护及处理缺点，先共享到这儿，再见